Гост 31659-2012 Октябрь 2, 2012 by ananin

У нас вы можете скачать гост 31659-2012 в fb2, txt, PDF, EPUB, doc, rtf, jar, djvu, lrf!

Рекомендуется брать сразу пять колоний для идентификации в случае эпидемиологической ситуации. Если на одной чашке менее пяти типичных или не совсем типичных колоний, то для идентификации берут все колонии.

Переносят отобранные колонии на поверхность предварительно подсушенного питательного агара см. Для подтверждения берут полностью изолированные колонии.

Используют только чистые культуры для биохимической и серологической идентификации. Из отобранных для биохимической идентификации колоний готовят мазки и окрашивают по Г раму по ГОСТ Бактерии рода Salmonella являются грамотрицательными палочками с закругленными концами. У отобранных и предварительно пересеянных грамотрицательных культур изучают характер роста на трехсахарном железистом агаре TSI-arape или агаре Клиглера, или среде Олькеницкого, возможность расщепления мочевины, образования ацетоина, индола, р-галактозидазы, L-лизиндекарбоксилазы, ферментации сахарозы и маннита, а также подвижность.

Петлей инокулируют специфические среды, указанные в 8. Засевают штрихом скошенную поверхность агара среды Олькеницкого. Интерпретируют изменения в среде следующим образом:. Агар Клиглера содержит два сахара, поэтому по скошенной поверхности учитывают только ферментацию лактозы. Если изолированы лактозоположительные бактерии рода Salmonella, то поверхность TSI-arapa желтая.

Предварительное определение культур бактерий рода Salmonella не может основываться только на результатах теста на TSI-arape. Дальнейшему изучению подвергают также лактозоположительные бактерии или бактерии, не образующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа. Культуры пересевают штрихом на поверхность агара Кристенсена с мочевиной.

При положительной реакции — расщеплении мочевины с выделением аммония цвет фенолового красного меняется от розового до светло-вишневого. Для уреазоположительных бактерий реакция часто становится видимой после 2 ч инкубирования. Бактерии рода Salmonella не расщепляют мочевину. Инокулнруют снизу жидкую среду. Помутнение и пурпурный цвет среды после инкубирования указывают на положительную реакцию. Желтый цвет указывает на отрицательную реакцию. Salmonella Paratyphi А не образует L-лизиндекарбоксилазу, остальные образуют.

Суспендируют петлей культуру в 0,25 см 3 физиологического раствора, прибавляют одну каплю толуола и встряхивают пробирку. Затем добавляют 0,25 см 3 реактива для определения р-галактозидазы и перемешивают. Желтый цвет указывает на положительную реакцию. Изменение цвета обнаруживается примерно через 20 мин. Бактерии рода Salmonella, кроме S. Для определения р-галактозидазной активности допускается использование ONPG-дисков. Петлей отбирают выросшую культуру и готовят из нее густую суспензию в 0,5 см стерильной дистиллированной воды.

Желтое окрашивание, появившееся через Для окончательного учета отрицательного результата посевы продолжают инкубировать в течение 2, 4 и 24 ч. Суспендируют петлей испытуемую культуру в стерильной пробирке, содержащей 3 см 3 VP среды или мясо-пептонного бульона с глюкозой.

После инкубации прибавляют две капли раствора креатина, три капли спиртового раствора 1-нафтола и две капли раствора гидроокиси калия, перемешивают содержимое пробирки после прибавления каждого реактива. Появление через 15 мин от розового до светло-красного окрашивания указывает на положительную реакцию.

Бактерии рода Salmonella не образуют ацетоина реакция Фогес-Проскауера отрицательная. Допускается определение ацетоина проводить без применения раствора креатина.

Для этого после инкубирования к 1 см 3 отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 см 3 раствора 1-нафтола и 0,2 см 3 раствора гидроокиси калия. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную реакцию. После инкубирования к посевам прибавляют по каплям 1 см 3 реактива Эрлиха или Ковача, содержимое пробирки перемешивают.

Образование красного кольца указывает на положительную реакцию. Желто-коричневое кольцо указывает на отрицательную реакцию. Бактерии рода Salmonella не образуют индол. Культуры пересевают в среды Гисса с маннитом или сахарозой. Бактерии рода Salmonella не ферментируют сахарозу, но ферментируют маннит.

При сбраживании маннита цвет среды изменяется, образуется или не образуется газ. Культуры пересевают уколом в полужидкий питательный агар или полужидкий мясо-пептонный агар.

При росте подвижных культур отмечается диффузионный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных культур — вокруг места уко-. Бактерии рода Salmonella подвижны, кроме S.

Определение присутствия соматического О-антигена, антигена вирулентности Vi-, жгутикового Н-антигена в изолированных колониях см. Сыворотки используют в соответствии с инструкцией изготовителя, если есть отличие от описания, приведенного ниже. Серологическую идентификацию для подтверждения принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами, предварительно пересеянными на поверхность мясо-пептонного агара или ГРМ-агара.

Помещают каплю физиологического раствора на тщательно очищенное предметное стекло. Диспергируют в этой капле часть тестируемой колонии так, чтобы получилась гомогенная и густая суспензия. Допускается размешивание части колонии в капле воды и перемешивание этого раствора с одной каплей физиологического раствора. Покачивают осторожно стекло в течение 30—60 с. Отмечают результаты на темном фоне, лучше с помощью увеличительного стекла. Если наблюдается в разной степени склеивание бактерий, то есть образование осадка, то считают, что тестируемые штаммы обладают самоагглютинацией.

Штаммы бактерий, обладающие самоагглютинацией, не подвергают дальнейшей серологической идентификации. Штаммы, у которых не выявлено самоагглютинации, испытывают в реакции агглютинации с агглютинирующими адсорбированными поливалентными сальмонеллезными О-сыворотками основных групп А. С, D, Е, а затем, если не выявлено О-антигенов с сыворотками основных групп, ставят реакцию с сыворотками редких групп.

Подготовка сывороток к постановке реакции агглютинации и методика ее проведения указаны в инструкции, прилагаемой к сывороткам. Агглютинация наличие О-антигенов проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости. При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную смесь.

Используют поли- и моновалентные сыворотки, одну после другой. Наличие Vi- и П-антигенов определяют при необходимости по санитарно-эпидемиологическим показаниям. Перед выявлением Н-антигенов испытуемой культурой инокулируют полужидкий агар. При отсутствии больших чашек используют для посева петлей две средние чашки одну за другой. Отмечают их местоположение на дне чашки. Типичные колонии бактерий рода Salmonella, вырастающие на XLD-arape, имеют черный центр и слегка прозрачную зону красноватого цвета, что принадлежит цвету индикатора.

Бактерии рода Salmonella -отрицательные варианты например, S. Paratyphi А образуют на XLD-arape розовые колонии с темным розовым центром, лактозоположительные бактерии рода Salmonella на XLD-arape - желтые колонии с почернением или без него.

На висмут-сульфит агаре бактерии рода Salmonella образуют черные колонии с характерным металлическим блеском, а также зеленоватые с темно-зеленым ободком и с пигментированием среды под колониями. На среде Эндо бактерии рода Salmonella образуют круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные колонии. На среде Плоскирева бактерии рода Salmonella образуют бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо, колонии. На среде Левина бактерии рода Salmonella образуют прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые колонии.

На бриллиантовом зеленом агаре бактерии рода Salmonella образуют красноватые или розовые, почти белые колонии их цвет зависит от штамма и срока инкубирования. Лактозоположительные и сахарозоположительные микроорганизмы образуют зеленоватые колонии, окруженные яркой желто-зеленой зоной. Агар с бриллиантовым зеленым применяют для выделения сальмонелл, кроме Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi.

Отсутствие в посевах на селективно-диагностических средах типичных или не совсем типичных колоний для бактерий рода Salmonella свидетельствует об отсутствии бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске объеме продукта. При наличии хотя бы на одной селективно-диагностической среде типичных или не совсем типичных колоний для бактерий рода Salmonella проводят их дальнейшую идентификацию.

Эти наборы используют в соответствии с инструкцией изготовителя. Для биохимической идентификации допускается использование тест-систем промышленного производства, зарегистрированных в странах, присоединившихся к стандарту, например "API 20E", "Rapid 20E". Рекомендуется брать сразу пять колоний для идентификации в случае эпидемиологической ситуации. Если на одной чашке менее пяти типичных или не совсем типичных колоний, то для идентификации берут все колонии.

Переносят отобранные колонии на поверхность предварительно подсушенного питательного агара см. Для подтверждения берут полностью изолированные колонии. Используют только чистые культуры для биохимической и серологической идентификации. Бактерии рода Salmonella являются грамотрицательными палочками с закругленными концами. Интерпретируют изменения в среде следующим образом: Агар Клиглера содержит два сахара, поэтому по скошенной поверхности учитывают только ферментацию лактозы.

Если изолированы лактозоположительные бактерии рода Salmonella, то поверхность TSI-arapa желтая. Предварительное определение культур бактерий рода Salmonella не может основываться только на результатах теста на TSI-arape. Дальнейшему изучению подвергают также лактозоположительные бактерии или бактерии, не образующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа. При положительной реакции - расщеплении мочевины с выделением аммония цвет фенолового красного меняется от розового до светло-вишневого.

Для уреазоположительных бактерий реакция часто становится видимой после 2 ч инкубирования. Бактерии рода Salmonella не расщепляют мочевину. Помутнение и пурпурный цвет среды после инкубирования указывают на положительную реакцию. Желтый цвет указывает на отрицательную реакцию. Salmonella Paratyphi А не образует L-лизиндекарбоксилазу, остальные образуют.

Затем добавляют 0,25 см реактива для определения -галактозидазы и перемешивают. Желтый цвет указывает на положительную реакцию. Изменение цвета обнаруживается примерно через 20 мин. Бактерии рода Salmonella, кроме S.

Для определения -галактозидазной активности допускается использование ONPG-дисков. Петлей отбирают выросшую культуру и готовят из нее густую суспензию в 0,5 см стерильной дистиллированной воды. Желтое окрашивание, появившееся через мин, указывает на положительную реакцию. Для окончательного учета отрицательного результата посевы продолжают инкубировать в течение 2, 4 и 24 ч.

После инкубации прибавляют две капли раствора креатина, три капли спиртового раствора 1-нафтола и две капли раствора гидроокиси калия, перемешивают содержимое пробирки после прибавления каждого реактива. Появление через 15 мин от розового до светло-красного окрашивания указывает на положительную реакцию.

Бактерии рода Salmonella не образуют ацетоина реакция Фогес-Проскауера отрицательная. Допускается определение ацетоина проводить без применения раствора креатина. Для этого после инкубирования к 1 см отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 см раствора 1-нафтола и 0,2 см раствора гидроокиси калия.

После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную реакцию. После инкубирования к посевам прибавляют по каплям 1 см реактива Эрлиха или Ковача, содержимое пробирки перемешивают.

Образование красного кольца указывает на положительную реакцию. Желто-коричневое кольцо указывает на отрицательную реакцию. Бактерии рода Salmonella не образуют индол. Бактерии рода Salmonella не ферментируют сахарозу, но ферментируют маннит. При сбраживании маннита цвет среды изменяется, образуется или не образуется газ. При росте подвижных культур отмечается диффузионный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных культур - вокруг места укола.

Бактерии рода Salmonella подвижны, кроме S. Сыворотки используют в соответствии с инструкцией изготовителя, если есть отличие от описания, приведенного ниже. Серологическую идентификацию для подтверждения принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами, предварительно пересеянными на поверхность мясо-пептонного агара или ГРМ-агара. Диспергируют в этой капле часть тестируемой колонии так, чтобы получилась гомогенная и густая суспензия. Допускается размешивание части колонии в капле воды и перемешивание этого раствора с одной каплей физиологического раствора.

Покачивают осторожно стекло в течение с. Отмечают результаты на темном фоне, лучше с помощью увеличительного стекла. Если наблюдается в разной степени склеивание бактерий, то есть образование осадка, то считают, что тестируемые штаммы обладают самоагглютинацией.

Штаммы бактерий, обладающие самоагглютинацией, не подвергают дальнейшей серологической идентификации. Подготовка сывороток к постановке реакции агглютинации и методика ее проведения указаны в инструкции, прилагаемой к сывороткам. Агглютинация наличие О-антигенов проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости. При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную смесь.

Используют поли- и моновалентные сыворотки, одну после другой. Перед выявлением Н-антигенов испытуемой культурой инокулируют полужидкий агар.

Полученную культуру используют для выявления Н-антигенов. Образование красного кольца указывает на положительную реакцию. Желто-коричневое кольцо указывает на отрицательную реакцию. Культуры пересевают в среды Гисса с маннитом или сахарозой. Бактерии рода Salmonella не ферментируют сахарозу но ферментируют маннит. При сбраживании маннита цвет среды изменяется, образуется или не образуется газ. При росте подвижных культур отмечается диффузионный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных культур - вокруг места укола.

Определение присутствия соматического О-антигена, антигена вирулентности Vi-, жгутикового Н-антигена в изолированных колониях см. Сыворотки используют в соответствии с инструкцией изготовителя, если есть отличие от описания, приведенного ниже. Серологическую идентификацию для подтверждения принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами, предварительно пересеянными на поверхность мясо-пептонного агара или ГРМ-агара.

Помещают каплю физиологического раствора на тщательно очищенное предметное стекло. Диспергируют в этой капле часть тестируемой колонии так, чтобы получилась гомогенная и густая суспензия. Допускается размешивание части колонии в капле воды и перемешивание этого раствора с одной каплей физиологического раствора. Покачивают осторожно стекло в течение с.

Отмечают результаты на темном фоне, лучше с помощью увеличительного стекла. Если наблюдается в разной степени склеивание бактерий, то есть образование осадка, то считают, что тестируемые штаммы обладают самоагглютинацией. Штаммы бактерий, обладающие самоагглютинацией, не подвергают дальнейшей серологической идентификации.

Штаммы, у которых не выявлено самоагглютинации, испытывают в реакции агглютинации с агглютинирующими адсорбированными поливалентными сальмонеллезными О-сыворотками основных групп А, В, С, D, Е, а затем, если не выявлено О-антигенов с сыворотками основных групп, ставят реакцию с сыворотками редких групп. Подготовка сывороток к постановке реакции агглютинации и методика ее проведения указаны в инструкции, прилагаемой к сывороткам.

Агглютинация наличие О-антигенов проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости. При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную смесь.

Наличие Vi- и Н-антигенов определяют при необходимости по санитарно-эпидемиологическим показаниям. Перед выявлением Н-антигенов испытуемой культурой инокулируют полужидкий агар. Полученную культуру используют для выявления Н-антигенов.

Интерпретация подтверждающих тестов см. При определении биохимических и серологических характеристик выделенных культур в качестве контроля используют типичный по этим показателям штамм бактерий рода Salmonella, указанный в разделе 6.

Культуры, предположительно отнесенные к бактериям рода Salmonella, передают в компетентные аккредитованные центры по изучению этих бактерий для окончательной идентификации.

Культуру при этом сопровождают всей полученной информацией с указанием наименования продукта, из которого выделен штамм. В этом случае результаты выявления бактерий рода Salmonella выдают после получения ответа по окончательной идентификации. Протокол испытания включает также информациюотом, сиспользованиемкакой среды для чашек см.

При нагревании компоненты растворяют в воде. Среду разливают во флаконы подходящей вместимости с учетом добавления необходимой навески продукта. Если навеска равна 25 г, то забуференную пептонную воду разливают по см 3.

Раствор готовят за день до приготовления RVS-бульона. Хлористый магний растворяют в воде. Поскольку эта соль очень гигроскопична, рекомендуется из новой открытой упаковки растворять ее по определенной схеме. Состав раствора соответствует В.

Раствор переносят в бутылку из темного стекла с притертой пробкой и хранят при комнатной температуре не более двух лет. Малахитовый зеленый оксалат переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью см 3 и доводят водой до метки. Раствор переносят в бутылку из темного стекла, хранят при комнатной температуре не более 8 мес. Прибавляют к см 3 раствора А см 3 раствора В и 10 см 3 раствора С. Перед использованием среду разливают по пробиркам по 10 см 3.

Рекомендуется использовать среду в день приготовления. При необходимости допускается готовую среду хранить по ГОСТ Примечание - Конечный состав среды: При нагревании растворяют компоненты в воде.

Кислый селенистокислый натрий растворяют с соблюдением правил асептики в стерильной дистиллированной воде. Раствор готовят непосредственно перед употреблением. Стерилизация приготовленной среды не допускается, так как при этом происходит редукция кислого селенистокислого натрия, выпадает осадок красного цвета и среда становится непригодной для использования.

Селенитовую среду выпускают в сухом виде и готовят по инструкции, указанной на этикетке. В мясо-пептонный бульон, приготовленный по ГОСТ Углекислый кальций стерилизуют по ГОСТ Гипосульфит натрия помещают в колбу вместимостью см 3 , растворяют в дистиллированной воде и доводят дистиллированной водой до метки.

Йодистый калий помещают в колбу вместимостью см 3 , растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, прибавляют кристаллический йод, растворяют его. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят при комнатной температуре в плотно закрытом сосуде из темного стекла.

Бриллиантовый зеленый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью см 3 и доводят дистиллированной водой до метки.

Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес. Сухую желчь растворяют в см 3 дистиллированной воды или используют см 3 натуральной желчи. Указанные растворы прибавляют к основе среды в приведенном выше порядке, перемешивая смесь после каждого прибавления, среду разливают по 10 см 3 в пробирки.

Для повышения селективности среды допускается добавлять к среде раствор новобиоцина натриевой соли из расчета 0, 5 см 3 раствора новобиоцина натриевой соли на см 3 основы среды. Новобиоцин натриевую соль растворяют в дистиллированной воде. При нагревании растворяют дегидратированные компоненты основы или дегидратированную основу в воде при частом помешивании.

Доводят до кипения, но не кипятят, избегая перегрева.