Гост 23453-2014 молоко методы определения количества соматических клеток Октябрь 2, 2012 by Аглая

У нас вы можете скачать гост 23453-2014 молоко методы определения количества соматических клеток в fb2, txt, PDF, EPUB, doc, rtf, jar, djvu, lrf!

После проведения анализа смеси для каждой анализируемой пробы сырого молока сосуд прибора следует подготовить для проведения следующего анализа согласно процедуре, описанной в инструкции по применению прибора. За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать:. Метод основан на разрушении цитоплазматической мембраны соматических клеток под действием лизогенного буфера.

При этом ядра клеток становятся доступными для действия флуоресцентного красителя, в качестве которого используется йодид пропидия. Nucleo-кассета, откалиброванная по объему, состоящая из поршня, проточной системы с флуоресцентным красителем йодидом пропидия и измерительной камеры.

Термометр стеклянный жидкостной нертутный по ГОСТ Допускается применение других средств измерения, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения.

Аккуратно перемешивают пробу сырого молока во флаконе для проб или стеклянном стакане при помощи стеклянной палочки, не допуская вспенивания. Вскрывают пакет с Nudeo-кассетой и вынимают ее для проведения измерений. Nucleo-кассета не должна находиться на свету более 3 мин. Набирают сырое молоко в Nudeo-кассету, опуская всасывающее устройство кассеты во флакон с пробой сырого молока и нажимая на поршень. Сырое молоко должно дойти до половины дорожки 3.

Помещают кассету в счетчик так. Количество соматических клеток в анализируемом сыром молоке устанавливают по результатам. Метод основан на высушивании распределенной на предметном стекле анализируемой пробы сырого молока с последующим окрашиванием мазка и подсчете с использованием микроскопа количества окрашенных соматических клеток на установленной площади.

Допускается использовать масляно-иммерсионные объективы. Бумага фильтровальная по ГОСТ Кислота уксусная по ГОСТ Хлорид натрия по ГОСТ Калий хлористый по ГОСТ Натрий фосфорнокислый двузамещенный 7-водный по ГОСТ , ч.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ , х. Вода дистиллированная по ГОСТ или деминерализованная. В вытяжном шкафу в смесь добавляют 0. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр и помещают в герметичный сосуд на хранение. В мерной колбе вместимостью см 3 в деминерализованной воде растворяют 8. Доводят объем метки деминерализованной водой. Примечание - Допускается использовать готовый буферный раствор с активной кислотностью, равной 7,2 ед.

Определение проводят в течение 6 ч после отбора проб. V b - объем буферного раствора, используемого для разбавления анализируемой пробы, см 3. Записывают коэффициент разбавления d.

Перед приготовлением мазка предметное стекло необходимо обезжирить и простерилизоеать. Используя микрошприц, отбирают 0. Микрошприц промывают анализируемой пробой. При необходимости тщательно и аккуратно очищают внешнюю сторону микрошприца, которая контактировала с анализируемой пробой.

Смесь помещают на чистое предметное стекло площадью 1 см 2. Высушенный на предметном стекле мазок погружают в окрашивающий раствор метилового синего и выдерживают в нем в течение мин. Высушивают мазок при комнатной температуре. Затем осторожно смывают излишки красителя в стакане с водопроводной водой. Высушивают вновь и хранят в условиях защиты от пыли. Используя микроскоп, подсчитывают соматические клетки в полученном мазке по 8. Подсчету подлежат соматические клетки, к числу которых относятся: Количество соматических клеток подсчитывается в целом, поэтому нет необходимости дифференцировать их между собой.

Высушенный на предметном стекле мазок погружают в окрашивающий раствор метилового синего и выдерживают в нем в течение мин.

Высушивают мазок при комнатной температуре. Затем осторожно смывают излишки красителя в стакане с водопроводной водой. Высушивают вновь и хранят в условиях защиты от пыли. Используя микроскоп, подсчитывают соматические клетки в полученном мазке по 8.

Подсчету подлежат соматические клетки, к числу которых относятся: Количество соматических клеток подсчитывается в целом, поэтому нет необходимости дифференцировать их между собой. Их размер колеблется от 0. Гифы вегетативные тела обычно крупные мкм. Не следует подсчитывать клетки с размером менее 8 мкм. Фрагменты клеток подсчитывают как одну клетку, если ядра четко не разделены. Подсчитывают соматические клетки в последовательных полях, в вертикальных полосах на равномерно размещенных полях.

Помещают нижний верхний край окружности поля микроскопа к внутренней нижней верхней границе мазка. После подсчета первого поля объектив передвигают на установленное расстояние 4. Расстояние d H - 1 мм считается пригодным.

Приыенание-В случае прямоугольной формы возможно расположение 5 полей на 1 мм в вертикальных полосах и 10 полос, расположенных на расстоянии 2 мм. Подсчет начинают приблизительно на расстоянии d L от левой стороны. Начинают подсчитывать от верхней или нижней границы прямоугольной площади. Помещают границу поверхности в центр зрения микроскопа.

Записывают число подсчитанных клеток. Проверяют контрольные значения Тестирование проводят с использованием проверочной кассеты, в которой находится определенное количество имитаторов соматических клеток.

Для выполнения тестирования необходимо войти в сервисное меню анализатора DC С. Пример - В тестовой кассете содержится имитаторов соматических клеток В противном случае анализатор подлежит тестированию в сервисном центре. Аккуратно перемешивают пробу молока во флаконе для проб, не допуская вспенивания. Набирают молоко в кассету, опуская всасывающее устройство кассеты во флакон с пробой молока и нажимая на поршень.

Молоко должно дойти до половины дорожки 3. Помещают кэсоету в анализатор так. Операции повторяют до достижения правой стороны шаблона. Результат определяют в соответствии с формулой 2. Примечание - В случае прямоугольной формы возможно расположение 5 полей на 1 мм в вертикальных полосах и 10 полос, расположенных на расстоянии 2 мм, что позволяет подсчитать 50 полей.

Подсчет начинают приблизительно на расстоянии d от левой стороны. Начинают подсчитывать от верхней или нижней границы прямоугольной площади. Помещают границу поверхности в центр зрения микроскопа. После подсчета всех клеток объектив передвигают в направлении, противоположном границе, и подсчитывают все клетки, видимые в этой полосе, вплоть до достижения противоположной границы. Записывают число подсчитанных клеток. Результат подсчитывают, как указано в 8.

Рассчитывают общую концентрацию клеток, используя следующее уравнение. W - ширина мазка, мм;. L - длина мазка, мм;. N - общее количество подсчитанных клеток, шт. D - диаметр поля микроскопа, мм;.

N - количество полностью подсчитанных полей, шт. V - объем испытуемой пробы мазка, равный 0,01 см d - коэффициент разбавления, используемый в 6. Рассчитывают общую концентрацию с клеток, используя следующее уравнение. Остальные обозначения приведены в 8. Использование значений точности на практике". Таблица 3 - Значения повторяемости. Концентрация, тыс клеток в 1 см. Среднее квадратичное отклонение повторяемости, s , тыс. Предел повторяемости, r , тыс.

Таблица 4 - Значения воспроизводимости. Среднее квадратичное отклонение воспроизводимости, S , тыс. Предел воспроизводимости, R , тыс. Для выполнения тестирования необходимо войти в сервисное меню анализатора DCC, поместить проверочную кассету в анализатор, провести измерение путем последовательного нажатия кнопок и записать результат измерение 1. Пример - В тестовой кассете содержится имитаторов соматических клеток В противном случае анализатор подлежит тестированию в сервисном центре.

Проводят измерения с кассетой N 1. Аккуратно перемешивают пробу молока во флаконе для проб, не допуская вспенивания. Набирают молоко в кассету, опуская всасывающее устройство кассеты во флакон с пробой молока и нажимая на поршень. Молоко должно дойти до половины дорожки 3. Помещают кассету в анализатор так, чтобы всасывающее устройство располагалось слева, после чего крышку отсека закрываем.

Проводят измерение, нажимая кнопку "Run", записывают результат. Затем рассчитывают среднеарифметическое измерений, выполненных через 1 мин путем последовательного нажатия кнопок "Del", "3", " ". Данное значение должно укладываться в допустимые ти процентные пределы разброса данных, полученных в режиме "Run". Значения измерений в режиме "Del", "3", " ". Предел измерения от до Полученное значение находится внутри установленных пределов. Если среднеарифметическое результатов измерений не укладывается в установленные пределы, то данная партия кассет бракуется.

Электронный текст документа подготовлен АО "Кодекс" и сверен по: Редакция документа с учетом изменений и дополнений подготовлена АО "Кодекс". Текст документа Статус Сканер копия. Тестирование анализатора DCC и партии кассет Библиография. ГОСТ Молоко сырое. Методы определения соматических клеток с Поправкой Название документа: Методы определения соматических клеток с Поправкой Номер документа: Стандартинформ, год Фактическая дата официального опубликования стандарта - апрель года информация с сайта http: Методы определения соматических клеток с Поправкой.

Данный документ представлен в формате djvu. Methods for determination of somatic cells ОКС Таблица 1 Характеристика вязкости консистенции смеси Ориентировочное количество соматических клеток в 1 см сырого молока Однородная жидкость или слабый сгусток, который слегка тянется за палочкой Не более тыс. Сгусток не выбрасывается палочкой из луночки пластинки От тыс.

Для каждой разбавленной пробы рассчитывают коэффициент разбавления по формуле 1 где d - коэффициент разбавления для получения надлежащего количества соматических клеток в анализируемой пробе, примерно тыс. Примечания 1 Лаборант должен уметь отличать соматические клетки от бактериальных, а также клеток дрожжей, плесневых грибов и от жировых шариков.

Рассчитывают общую концентрацию клеток, используя следующее уравнение , 2 или , 3 с постоянным рабочим коэффициентом f , 4 где с - общая концентрация, выраженная в количестве клеток на 1 см ; W - ширина мазка, мм; L - длина мазка, мм; N - общее количество подсчитанных клеток, шт. Рассчитывают общую концентрацию с клеток, используя следующее уравнение , 5 или , 6 с постоянным рабочим коэффициентом f , 7 где N - количество полностью подсчитанных полос.

Таблица 3 - Значения повторяемости Концентрация, тыс клеток в 1 см Среднее квадратичное отклонение повторяемости, s , тыс. Таблица 4 - Значения воспроизводимости Концентрация, тыс. Стандартинформ, Редакция документа с учетом изменений и дополнений подготовлена АО "Кодекс". Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате pdf или djvu.